မာတိကာ:

ဒစ်ဂျစ်တယ် PCR အလုပ်လုပ်ပုံ
ဒစ်ဂျစ်တယ် PCR အလုပ်လုပ်ပုံ
Anonim

ဒစ်ဂျစ်တယ် polymerase တုံ့ပြန်မှုနှင့် ပတ်သက်သည့် အကြောင်းအရာကို ဆွေးနွေးရာတွင် သိရန်များစွာရှိသည်။ ဒစ်ဂျစ်တယ် PCR ကို ဓာတ်ခွဲခန်းဆက်တင်တွင် အရေးပါသည့်အရာအဖြစ် လက်တွေ့ဇီဝဗေဒတွင် မကြာခဏအသုံးပြုသည်။ နမူနာစမ်းသပ်ခြင်းအက်ပ်လီကေးရှင်း၏မျက်နှာစာများစွာကိုလွှမ်းခြုံထားသည့် quantitative PCR နှင့်နှိုင်းယှဉ်လျှင် အားသာချက်များစွာရှိသည်။

PCR တီထွင်မှုသည် 1980 ခုနှစ်များအတွင်းမှ စတင်ခဲ့ပြီး ထိုအချိန်မှစ၍ အဏုဇီဝအေးဂျင့်များကို ရှာဖွေတွေ့ရှိရန် ပိုမိုလွယ်ကူလာခဲ့သည်။ အဆင့်မြင့် အဏုဇီဝဗေဒ သုတေသနကို ဤနည်းပညာဖြင့် အချိန်အတော်ကြာအောင် ဦးဆောင်ခဲ့ပြီး၊ ၎င်းသည် ဆေးခန်းနယ်ပယ်တွင် တိုးတက်ရန် အကောင်းဆုံးကိရိယာ ဖြစ်လာသည်။

PCR သည် ယခုအခါတွင် ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းရှိ ဆေးဘက်ဆိုင်ရာ ဓာတ်ခွဲခန်းတိုင်းတွင် လုပ်ငန်းဆောင်တာများကို ကျယ်ကျယ်ပြန့်ပြန့် အဆင်ပြေချောမွေ့စေရန်အတွက် သီးခြားတူရိယာများဖြင့် ရရှိနိုင်ပါသည်။ ဒစ်ဂျစ်တယ်ပိုလီမာရတ်ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှုသည် ရှုပ်ထွေးပုံပေါ်နိုင်ပြီး ၎င်းသည် ၎င်းကို မည်သည့်အရာနှင့် တည်ဆောက်ထားသည့် ကဏ္ဍများစွာသို့ ခွဲခြမ်းသွားစေရန် ရောက်ရှိလာခြင်းဖြစ်သည်။

ဒစ်ဂျစ်တယ် PCR အလုပ်လုပ်ပုံ

၎င်းတို့၏ အဏုဇီဝဗေဒဆိုင်ရာ အသက်မွေးဝမ်းကျောင်းများတွင် ၎င်းကိုအသုံးပြုရမည့် ဆေးခန်းဝန်ထမ်းများအားလုံးအတွက် dPCR မည်သို့အလုပ်လုပ်သည်ကို နားလည်ရန် အရေးကြီးပါသည်။ qPCR နှင့် dPCR တွင်အသုံးပြုသည့်နည်းလမ်းနှစ်ခုစလုံးသည် လုပ်ငန်းစဉ်အတွင်းဖြစ်ပေါ်နေသောဓာတုတုံ့ပြန်မှုကိုကြည့်ရှုသောအခါတွင်သက်ရောက်သည်။

dPCR သည် ပိုမိုကောင်းမွန်သော ရလဒ်များနှင့် ပတ်သက်လာသောအခါတွင် အားသာချက်များစွာရှိသောကြောင့် လူသိများသည်။ အလွန်အကဲဆတ်ပြီး အလွန်တိကျသော ပမာဏလိုအပ်သည့် စနစ်များကို အသုံးချခြင်းသည် dPCR နည်းစနစ်များကို အသုံးပြုခြင်းအားဖြင့် ပိုမိုကောင်းမွန်ကြောင်း ပြသထားသည်။

dPCR စနစ် အလုပ်လုပ်ဆောင်ရန် အဆင့်နှစ်ဆင့်ရှိပါသည်။ ဤအရာများသည် စနစ်၏လုပ်ဆောင်နိုင်စွမ်းကို အောင်မြင်စွာအသုံးချရန်နှင့် ပရောဂျက်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုတွင် လိုချင်သော အရေအတွက်ရလဒ်များရရှိရန် အရေးကြီးပါသည်။

စီးပွားဖြစ်ရရှိနိုင်သည့် dPCR စနစ်များကို အသိအမှတ်ပြုထားပြီး၊ စဉ်းစားရန်အကောင်းဆုံးများကို ယုံကြည်စိတ်ချရသော အရင်းအမြစ်များမှ သင်မေးမြန်းနိုင်ပါသည်။ PCR လုပ်ငန်းစဉ်များသည် မည်သည့်ဓာတ်ခွဲခန်းမှ လက်တွေ့နမူနာများတွင် တိကျသော nucleic acid အစိတ်အပိုင်းများကို ရှာဖွေဖော်ထုတ်ခြင်းနှင့် အရေအတွက်ကို ဖြည့်ဆည်းပေးသည်။

dPCR နှင့် qPCR တို့သည် ၎င်းတို့၏ ကွဲပြားချက်များ ရှိပြီး စနစ်များတွင် ပါဝင်သော တုံ့ပြန်မှု လုပ်ငန်းစဉ်များမှ ရလဒ်များကို ၎င်းတို့ မည်သို့ ထုတ်ပေးပုံမှာ အလွန် ဆန်းကြယ်ပါသည်။ dPCR ၏ချဉ်းကပ်မှုမှာ စမ်းသပ်ခွဲခြမ်းစိတ်ဖြာမှုအတွင်း သတ်သတ်မှတ်မှတ်နမူနာတစ်ခုရှိ DNA မော်လီကျူးများ၏ အရေအတွက် အရေအတွက်နှင့် ပတ်သက်သည်။

DNA ချဲ့ထွင်မှုတုံ့ပြန်မှုသည် qPCR ရှိ ချောင်းဆိုးဆေးတွင်ပါ၀င်သည်၊ သို့သော် dPCR တွင် သီးခြားလွတ်လပ်သောအစိတ်အပိုင်းများ ကွဲပြားမှုထောင်ပေါင်းများစွာရှိသည်။ ၎င်းတို့ကို အပိုင်းများခွဲ၍ ဆံချည်မျှင်မျှင်များ သို့မဟုတ် မော်လီကျူးတစ်ခုစီပါရှိသော တုံ့ပြန်မှုအရောအနှောများပါရှိသော microwell plates များမှတစ်ဆင့် တွေ့မြင်နိုင်သည်။

လက်တွေ့အဏုဇီဝဗေဒတွင် dPCR လျှောက်လွှာများ

dPCR သည် တိကျသောရလဒ်များရရှိရန် နည်းလမ်းများထုတ်လုပ်ရန် တုံ့ပြန်မှုများအကြိမ်ကြိမ်ပြုလုပ်ခြင်းဖြင့် လက်တွေ့အဏုဇီဝစမ်းသပ်မှု၏အဓိကတွင်ရှိပုံရသည်။ dPCR ၏ အကြွင်းမဲ့ ပမာဏအတွက် စံနှုန်းများသည် မြင့်မားသော စံကိုက်ညှိခြင်းနှင့် လုပ်ငန်းစဉ်တစ်ခုလုံး၏ ထိရောက်သော ချဲ့ထွင်မှုအပေါ် အခြေခံသည်။

အဆင့်အတန်းမြင့်စနစ်များသည် ရောဂါပိုးတစ်ခုခု၏ load ကိုဆုံးဖြတ်ရန်၊ ၎င်းတို့၏ sequences တွင် ကွဲပြားမှုရှိသော ပစ်မှတ်များကို အရေအတွက်သတ်မှတ်ခြင်းနှင့် inhibitors များဖြင့်နမူနာများဖြင့်အသုံးပြုရန် ပြီးပြည့်စုံပါသည်။ ဒစ်ဂျစ်တယ် PCR ကိုအသုံးပြုခြင်းသည် လက်တွေ့နမူနာအားလုံးတွင် RNA နှင့် DNA ဗိုင်းရပ်စ်များ၊ ကပ်ပါးပိုးများနှင့် ဘက်တီးရီးယားများကိုပင် မိတ္တူနံပါတ်များကို ဆုံးဖြတ်နိုင်စေခဲ့သည်။

ပြောင်းလဲမှုများသည် လုပ်ငန်းစဉ်အတွင်း ရိုင်း-အမျိုးအစား အစီအစဥ်များဖြင့် ၎င်း၏ ထောက်လှမ်းမှုစွမ်းရည်များမှတစ်ဆင့် dPCR ကို အသုံးပြုရာတွင် အရေးကြီးသော နယ်ပယ်တစ်ခုဖြစ်သည်။ qPCR သည် မည်သည့် mutant allele ၏ အများဆုံး 10% အထိသာ ရှာဖွေတွေ့ရှိနိုင်သောကြောင့် qPCR ကို အသုံးပြု၍ ထောက်လှမ်းခြင်း အောင်မြင်မှုများကို dPCR နှင့် နှိုင်းယှဉ်၍မရပါ။ အခြားတစ်ဖက်တွင်၊ dPCR သည် တောရိုင်းအမျိုးအစား KRAS ဗီဇထောင်ပေါင်းများစွာအတွင်းမှ mutant များကိုရှာဖွေခြင်းထက် ပိုမိုကောင်းမွန်စွာလုပ်ဆောင်သည်။

အကောင်အထည်ဖော်ရေး ထည့်သွင်းစဉ်းစားမှုများ

dPCR အကောင်အထည်ဖော်မှု ဖြစ်နိုင်ချေကို မည်သည့်အရာက ဖြစ်နိုင်ကြောင်းနှင့် မည်သည့် setting တွင် အကောင်းဆုံးလုပ်ဆောင်ရမည်ကို ဦးစွာစဉ်းစားရန် အရေးကြီးပါသည်။ qPCR နှင့် နှိုင်းယှဉ်ပါက၊ dPCR သည် ပိုမိုတိကျသော အားသာချက်များ ရှိသည်၊ ထို့ကြောင့် ဓါတ်ခွဲခန်းများတွင် dPCR ကို အကောင်အထည်ဖော်ခြင်းသည် ဖြစ်နိုင်ခြေနည်းပါသည်။

အကောင်အထည်ဖော်ရေးလုပ်ထုံးလုပ်နည်းများသည် dPCR ၏စွမ်းဆောင်ရည်သည် qPCR ထက်ပိုကောင်းကြောင်း ရှင်းရှင်းလင်းလင်းသိရှိနိုင်သည့် အခြေအနေများအတွက်လည်း ဖြည့်ဆည်းပေးသင့်ပါသည်။ ဗိုင်းရပ်စ်ဝန်ကို တိုင်းတာခြင်းအတွက် မြင့်မားတိကျသော လုပ်ငန်းစဉ်ရှိခြင်းသည် ကွင်းဆက်တုံ့ပြန်မှုတစ်ခုလုံး၏ သမာဓိတစ်ခုလုံးကို ထိခိုက်စေမည့် ၎င်းကို အခြားတန်ဖိုးများနှင့် မရောထွေးစေဘဲ တစ်စုံတစ်ဦးမှ သေချာနိုင်သည့်ရလဒ်များကို ရှာဖွေရန် အရေးကြီးပါသည်။

ပိုမိုတိကျပြီး တိကျသောရလဒ်များပေးစွမ်းရန် မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်ကို အများသဘောတူသော primer ကိုအသုံးပြုကာ၊ ပိုမိုတိကျပြီးတိကျသောရလဒ်များပေးဆောင်ရန်၊ နမူနာစမ်းသပ်ခြင်းနှင့်အတူ inhibitors များအသုံးပြုခြင်းဖြင့်လည်း မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်ကို ချဲ့ထွင်ရန်အတွက်လည်း အသုံးပြုပါသည်။ qPCR စစ်ဆေးမှုများအတွက် စရိုက်လက္ခဏာစံနှုန်းများအတွက် dPCR ကို အသုံးပြုရန် အမြဲအကြံပြုထားသည်။ Stilla Technologies သည် ဤနည်းပညာကို နောက်တစ်ဆင့်တက်လှမ်းရန် ဦးဆောင်နေသည့် လက်ရှိကုမ္ပဏီများထဲမှ တစ်ခုဖြစ်သည်။

ဒစ်ဂျစ်တယ် PCR နည်းပညာတွင် တိုးတက်မှုသည် လက်တွေ့အဏုဇီဝဗေဒတွင် ၎င်း၏ မတူကွဲပြားသော အပလီကေးရှင်းများမှ ပြီးပြည့်စုံသော ရွေးချယ်မှုတစ်ခုဖြစ်သည်။ ၎င်းတွင် အနည်းငယ်မျှသော အားနည်းချက်များကို မျှတစွာ မျှဝေပါသည်။ ၎င်းတွင်ပါဝင်သည့် ရှုပ်ထွေးမှုများ၊ ၎င်းကြုံတွေ့နေရသည့် တိကျသောတုံ့ပြန်မှုများနှင့်အတူ ၎င်းအား မည်သည့်စနစ်မှ ယခုအချိန်တွင် မအနိုင်ယူနိုင်သော မြင့်မားသောစွမ်းဆောင်ရည်အားလုံးကို ပေးစွမ်းသည်။

ဆေးခန်းနည်းပညာ တိုးတက်လာသည်နှင့်အမျှ၊ ကန့်သတ်ချက်များကို မျိုးဆက်သစ်တီထွင်ထားသော ကိရိယာများဖြင့် ဆေးခန်းလုပ်ငန်းတစ်ခုလုံးကို တော်လှန်ပြောင်းလဲပစ်မည်ဖြစ်သည်။ လောလောဆယ်တွင်၊ dPCR စနစ်များကိုအသုံးပြုခြင်းသည် ကမ္ဘာတစ်ဝှမ်းလုံးရှိ အဏုဇီဝရောဂါရှာဖွေရေးဓာတ်ခွဲခန်းများတွင် စံတစ်ခုဖြစ်ကြောင်း ထင်ရှားပါသည်။

ခေါင်းစဉ်အားဖြင့်လူကြိုက်များ